細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中周期的測(cè)定
一、原理
     細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。
單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期。
測(cè)定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測(cè)定細(xì)胞周期的方法。
BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后，可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料，經(jīng)過(guò)兩個(gè)細(xì)胞周期后，細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期，則染色體中約一半為兩條單體均淺染，另一半為一深一淺。細(xì)胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期，則兩條單體均深染。計(jì)分裂相中各期比例，就可算出細(xì)胞周期的值。
二、儀器、用品與試劑
1、儀器、用品：同常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)
2、試劑：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液
三、操作步驟
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至指數(shù)期時(shí)，向培養(yǎng)液中加入BrdU，使zui終濃度為10μg/ml。
2、44小時(shí)加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。
3、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。
4、常規(guī)染色體制片（見(jiàn)第三部分：染色體技術(shù)）。
5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
6、棄去2×SSC液，流水沖洗。
7、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干。
8、鏡檢100個(gè)分裂相，計(jì)*、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。
9、計(jì)算： 細(xì)胞周期（Tc）=48/（小時(shí)）
附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml   4℃下避光保存。
   （2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存

上海恒遠(yuǎn)產(chǎn)品涵蓋免疫調(diào)節(jié)蛋白、白介素、集落刺激因子、生長(zhǎng)因子、化學(xué)趨化因子、干擾素、脂聯(lián)素、成纖維生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、腫瘤壞死因子、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素和防御素等諸多生命科學(xué)研究領(lǐng)域中重要的生物活性分子。 為跟蹤當(dāng)今科研發(fā)展、滿足日益增長(zhǎng)的需求，上海恒遠(yuǎn)研制出無(wú)動(dòng)物成分的重組蛋白 。這些蛋白是利用專(zhuān)有的無(wú)動(dòng)物成分生產(chǎn)設(shè)施，在嚴(yán)格的無(wú)動(dòng)物成分條件下生產(chǎn)出來(lái)，因此痕量的動(dòng)物源性污染引發(fā)潛在問(wèn)題的可能性被降至zui低，從而*達(dá)到臨床前研究和細(xì)胞治療用標(biāo)準(zhǔn)。此外，上海恒遠(yuǎn)還開(kāi)發(fā)出無(wú)動(dòng)物成分的培養(yǎng)基添加物試劑盒 。這些試劑盒經(jīng)改良設(shè)計(jì)，其中的無(wú)血清組分對(duì)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)有更好的維持能力。